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Service d’expression et purification de protéine recombinante en baculovirus
Le service d’expression de protéine proposé par Proteogenix fonctionne par phases :
Phase 0 : Synthèse de gène et optimisation de codons
L’étape de synthèse de gène est très importante puisqu’elle nous permet d’optimiser les codons rares pour le système d’expression baculovirus et donc d’augmenter dans certains cas les rendements de production de manière considérable.
Phase I : Clonage de l’ADNc en vecteur d’expression
Cette étape consiste à intégrer l’ADNc dans un ou plusieurs vecteurs d’expression eucaryote contenant un tag qui permettra de purifier la protéine sur colonne.
Phase II : Génération du virus recombinant et évaluation de l’expression de la protéine recombinante en baculovirus
- Generation de l’ADN Bacmid recombinant
- Transfection des cellules d’insecte avec cell with l’ADN Bacmid recombinant
- Generation de stocks de virus
- Infection des cellules d’insecte
- Gel SDS-PAGE et/ou Western blot
Phase III : Production et purification de protéine à partir d’un litre
- Expression et purification de protéine à partir d’un litre de cellules d’insecte
- Une étape de purification
- Contrôle qualité par Gel SDS-PAGE et/ou Western blot
Délais moyens :
- Clonage : 2 semaines
- Tests d’expression : 5 à 6 semaines
- Production & Purification : 1 à 2 semaines