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Service d’expression et purification de protéine recombinante dans la levure
Phase 0 : Synthèse de gène et optimisation de codons
L’étape de synthèse de gène est très importante puisqu’elle nous permet d’optimiser les codons rares pour les systèmes d’expressions de levure et donc d’augmenter dans certains cas les rendements de production de manière considérable.
Phase I : Clonage de l’ADNc en vecteur d’expression
Cette étape consiste à intégrer l’ADNc dans un ou plusieurs vecteurs d’expression eucaryote contenant un tag qui permettra de purifier la protéine sur colonne.
Nous réalisons ensuite un maxi-prep avant de linéariser l’ADN.
Phase II : Tests d’expression de la protéine recombinante :
- Transformation de l’ADN linéaire dans la souche de levure adéquate
- Confirmation des transformants positifs par PCR
- Confirmation de l’expression
- Purification par affinité sur résine spécifique
- Analyse par gel SDS-PAGE (lysats) et/ou Western blot
Phase III : Production & Purification de la protéine recombinante :
- Culture de levure : 1 litre
- Purification en une étape ou plus pour atteindre un degré de pureté égal ou supérieur à 90%
- Control qualité par gel SDS-PAGE et/ou Western Blot
NB : la Phase de production est réalisée selon les desiderata du client en fonction des résultats obtenus en fin de Phase Test. Il est ensuite possible de réaliser des productions de petite ou très grande échelle.
Délais moyens :
- Clonage : 2 semaines
- Tests d’expression : 2 semaines
- Production & Purification : 2 semaines