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Proteogenix – Purification de protéine recombinante
Purification de protéine
La croissance des besoins au niveau mondial en expression et purification de protéine recombinante entraine la nécessité de mettre en place des stratégies toujours plus ingénieuses pour améliorer les rendements, la pureté et la qualité du repliement (conformation de la protéine).
Chromatographie d’affinité IMAC
Les méthodes de purification utilisées par Proteogenix sont très variées et dépendent de la nature des protéines, des conditions d’expression et du tag choisit. La chromatographie d’affinité dite « IMAC (Immobilized-metal affinity chromatography) » est cependant la plus utilisée car elle a notamment l’avantage d’une purification par binding fort et spécifique et permet l’utilisation de conditions d’élution moins préjudiciables pour l’intégrité de la protéine.
Les tags pour la purification de protéine recombinante
La purification se fait le plus souvent par affinité contre un tag dont le choix dépend de la nature de la protéine. Proteogenix utilise le plus couramment des tags GST et Histidine mais il est également possible selon le contexte d’utiliser des tags comme le MBP, FLAG, HA, SUMO…
On utilise par exemple les tags GST, MBP ou SUMO entre autres pour améliorer la solubilité des protéines.
Purification de protéine par échange d’ions et clivage
Pour des utilisations cliniques, la présence de tags peut être problématique et il est de ce fait intéressant de se tourner vers des purifications de type échange d’ions par exemple. Proteogenix propose aussi la possibilité de cliver les tags utilisés mais une fois de plus un grand nombre de possibilité existent. En effet, l’étude du contexte d’expression et de purification de la protéine recombinante permet de choisir entre un clivage à l’entérokinase (site qui peut être intégré lors de la synthèse de gène entre le tag et la protéine) suivi d’une purification, ou le clivage GST directement sur colonne entre autres. Dans la grande majorité des cas il s’agit d’endoprotéases recombinantes qui reconnaissent une séquence spécifique. Chaque solution présente des avantages et inconvénients : certaines laissent quelques acides aminés provenant du site de clivage, les rendements de clivage varient fortement…
L’utilisation de tags permet d’obtenir une pureté relativement bonne, souvent supérieure à 90% bien que certains tags, en raison de leur meilleure spécificité, permettent d’obtenir des niveaux de pureté supérieurs à d’autres.