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Proteogenix – Le refolding
Corps d’inclusion et refolding
La production de protéine recombinante dans E. Coli présente le désavantage d’exprimer une quantité significative de protéines dans les corps d’inclusions ou culots. Il s’agit souvent d’un système de défense de la bactérie qui se protège des protéines surexprimées en les enfermant dans ces corps d’inclusion ce qui a pour conséquence de rendre les protéines insolubles.
Dans ce type de situation, Proteogenix est obligé d’utiliser des détergents et/ou chaotropes comme l’urée pour extraire et resolubiliser les protéines à partir des culots et/ou corps d’inclusion. L’inconvénient dans ce cas est que ces conditions ont un effet dénaturant sur les protéines obtenues.
Dialyse, changement de tampon par chromatographie, dilution rapide ou renaturation sur colonne
Selon l’application ou l’utilisation finale de la protéine (étude fonctionnelle ou structurale par exemple), il est parfois nécessaire d’éliminer l’agent dénaturant (ex : urée) pour renaturer / refolder la protéine. Encore une fois, un grand nombre de possibilités sont envisageables et notamment la dialyse, le changement de tampon par chromatographie, la dilution rapide ou par goutte à goutte ou encore la renaturation sur colonne. Pour l’ensemble de ces techniques, l’utilisation de différents additifs dans le tampon final est par ailleurs envisageable pour améliorer la solubilité des protéines et empêcher la précipitation au cours du processus d’élimination de l’agent dénaturant. Il peut s’agir par exemple de détergents (ex : SDS), de stabilisants (ex : glycérol), de chaotrope (ex : urée), de sels (ex : citrate de sodium) ou encore de chélateurs (ex : EDTA).